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    上海氣相色譜儀新技術下的改革
    點擊次數:1770 發布時間:2014-07-24
       上海氣相色譜儀利用氣相色譜層析技術做為微生物診斷的工具已成功地用于微生物的分類和鑒定。該法敏感性強,能夠分離和檢測到毫微克的水平。上海氣相色譜儀具有快速的特點,常在數十分鐘甚至數小時就可以對傳染病做出早期診斷。其結果穩定,重復性好,但不足之處是操作中各因素不易控制,方法不易標化等。
      上海氣相色譜儀的基本部件(層析柜)
      1.譜柱及加熱爐色譜柱一般由金屬或玻璃制成,通常采用的柱長2m~4m,內徑2mm, 毛細管柱長度可達20m~150m,內徑為0.2mm。
      2.載氣上海氣相色譜儀常用的載氣主要有氮、氬、氫和二氧化碳等。這些氣體一般都由高壓氣瓶供給。
      上海氣相色譜儀載體一般采用惰性、多孔的固體顆粒。多由硅藻土或玻璃珠制成,分析不同極性的微生物化合物,為了獲得zui適的分離條件,上海氣相色譜儀要求有不同固定相的載體。目前比較常用的載體有:聚乙二醇(CarbOwax 20M)、F F A P(聚乙二醇20M和2-硝基對苯二甲酸的反應產物),OV—17(苯基甲基硅酮)。OV-210、SE-30(甲基硅酮)、Chromosorb G(白色硅藻土載體)等。上海氣相色譜儀柱加熱爐在溫度控制上是非常重要的。
      3.上海氣相色譜儀進樣器可以用于分離固相、氣相和液相標本。液相標本采用微升注射器穿過橡皮隔片注入,上海氣相色譜儀氣相標本采用特種氣相注射器注入。
      4. 紀錄儀
      5. 數據處理裝置上海氣相色譜儀一般均附有數據處理計算機。
      上海氣相色譜儀試驗條件的選擇
      1.柱溫選擇上海氣相色譜儀柱溫選擇對分離度影響很大,常是條件選擇的關鍵。選擇的基本原則是:在使zui難分離的組分有盡可能好的分離高度的前提下,上海氣相色譜儀盡可能采取較低溫度,但以保留時間適宜及不拖尾為度。
     ?、?高沸點混合物(200℃~400℃),若需在較低的柱溫下分析,上海氣相色譜儀可采用低固定液配比1%~3%,采用高靈敏檢測器,柱溫可比沸點低100℃~150℃,在200℃~250℃的柱溫下分析。
                                  上海氣相色譜儀
     ?、?上海氣相色譜儀沸點<300℃的樣品,可用3%~25%固定液配比。沸點越低,所用配比越高,柱溫可比平均沸點低50℃至平均沸點的范圍選擇。
      2.載體選擇  載體采用低線速時,宜用氮氣;高線速時用氫氣。柱越長,上海氣相色譜儀柱內有較大壓力降,宜用氫氣。載氣采用低線速時為20ml~80ml/min。
      3.上海氣相色譜儀色譜柱的選擇  要注意極性及zui高使用溫度,柱溫不能超過zui高使用溫度。上海氣相色譜儀固定相按極性相似的原則選擇。
      色譜柱的內徑大小、長度都能影響分離率。一般而言,內徑越小,長度越長,分離效果越好,上海氣相色譜儀一般柱長為1m~5m(毛細管柱則20m~100m)。
      上海氣相色譜儀填充劑顆粒一般采用40目~60目,60目~80目及80目~100目大小。上海氣相色譜儀長柱子宜用粒度大些的,以減少柱壓降,短柱子則用粒度細的。
      氣相色譜中固定液的含量對分離效率的影響較大。上海氣相色譜儀一般采用固定液與載體重量之比為15︰100~25︰100。采用高靈敏度的檢測器,上海氣相色譜儀由于進樣量減少,固定液含量可以降至5︰100以下。這樣可以使用較低柱溫,從而提高柱效,縮短分析時間。上海氣相色譜儀但固定液用量太少會引起吸附。
      4.上海氣相色譜儀其它條件
     ?、?氣化室溫度及檢測室溫度選擇:氣化溫度取決于樣品的揮發性、沸點、穩定性以及進樣量,一般選擇稍高于樣品沸點,上海氣相色譜儀但不要超過沸點50%以上,以防分解。檢測室溫度需高于柱溫,一般高于柱溫30℃左右或與氣化室同溫。
     ?、?上海氣相色譜儀進樣量:固定相在配比15%~35%的層析柱時,zui大進樣量液體為10μl,氣體為10ml。一般樣品量液體4μl,氣體為0.5ml~3ml,固體小于1mg。
     ?、?上海氣相色譜儀橋電位選擇:散熱多和選擇大的橋電位,在靈敏度相同的情況下,應盡量選擇低橋電位,上海氣相色譜儀以保護熱敏元件。
      上海氣相色譜儀層析是一種分離分析的方法,因此上海氣相色譜儀的特點是適合于多組分混合物的定性和定量分析。
      1.定性上海氣相色譜儀對于一已知范圍的混合物,用此法定性很容易,但對于范圍未知的混合物來說,上海氣相色譜儀則需要配合化學分析及其它儀器分析等。
     ?、?利用保留值定性法:上海氣相色譜儀同一種物質在一根層析柱上保留時間相同。取樣品各可能組分的純物質加入樣品中,混合進樣,對此上海氣相色譜儀加入后的色譜圖,若某色譜峰相對譜高,則該色譜峰的組分與純物質可能為同一物質。
     ?、?化學反應定性法:即把色譜柱的流出物,上海氣相色譜儀通過官能團試劑中,觀察試劑的顏色是否發生變化或是否有沉淀,上海氣相色譜儀而判斷該組分含什么官能團或屬于何類化合物。
     ?、?上海氣相色譜儀兩譜聯用定性法:即利用質譜儀、紅外分光光度計等來進行測定,定性。
      2.定量  在實驗條件恒定時,峰面積或峰高與組分的含量成正比,因此可以利用峰面積或峰高面積或峰高來進行定量。上海氣相色譜儀對于微生物標本的氣相色譜分析常根據以下幾點來進行比較。
     ?、?上海氣相色譜儀峰的有無和峰的大小。
     ?、?按10個重復標本分析計算的平均t值(標準差)。
     ?、?同標準化合物的相對保留時間進行對比,上海氣相色譜儀而對某化合物做出鑒定。